Il tempo di analisi è notevolmente ridotto da circa un'ora a pochi minuti grazie al metodo RTF-EXPAR recentemente riportato che utilizza un approccio privo di trascrittasi inversa (RTF) per la conversione di RNA ai miglioramenti DNA seguito da EXPAR (Exponential Amplification Reaction) per l'amplificazione a singola temperatura.
Controllare il tasso di COVID-19 La diffusione richiede una strategia di test del virus accurata e più rapida. RT-PCR (reazione a catena della polimerasi con trascrittasi inversa), il metodo di test più accurato attualmente utilizzato è un test in due fasi che richiede circa 60 minuti per campione.
I ricercatori dell'Università di Birmingham hanno segnalato un nuovo metodo per il rilevamento di SARS-CoV-2. Ciò potrebbe consentire test molto più rapidi ed è sufficientemente sensibile.
Il rilevamento dell'RNA virale da RT-PCR (reazione a catena della polimerasi trascrittasi inversa) comporta la conversione dell'RNA virale in DNA complementare (cDNA) seguita dall'amplificazione del cDNA mediante una PCR quantitativa (qPCR). Il cDNA viene quindi rilevato utilizzando un colorante fluorescente. Questo richiede fino a un'ora.
Il tempo di analisi è notevolmente ridotto da circa un'ora a pochi minuti grazie al metodo RTF-EXPAR recentemente riportato che utilizza un approccio privo di trascrittasi inversa (RTF) per la conversione dell'RNA in DNA seguito da EXPAR (Exponential Amplification Reaction) per l'amplificazione a singola temperatura. L'amplificazione che avviene a una singola temperatura è la chiave per la velocità, perché evita lunghe fasi di riscaldamento e raffreddamento della RT-PCR. Inoltre, la sezione di DNA amplificata è più piccola rispetto alla RT-PCR. Quindi, EXPAR genera fino a 108 filamenti di prodotto DNA in pochi minuti. La formazione del duplex viene monitorata, come nel metodo RT-PCR, utilizzando il colorante fluorescente, SYBR Green.
È interessante notare che il nuovo metodo può essere modificato per rilevare diverse altre malattie infettive causate da virus a RNA, ad esempio Ebola, RSV, ecc.
Sorgenti:
Carter et al (2020). Rilevamento in meno di 5 minuti dell'RNA di SARS-CoV-2 utilizzando una reazione di amplificazione esponenziale priva di trascrittasi inversa, RTF-EXPAR. Prestampa. Pubblicato su medRxiv Pubblicato il 04 gennaio 2021. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
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